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技術(shù)文獻

細胞培養實(shí)驗室設備配置及用途

2024-04-28 19:59:12 kalor 14

★ 1. 超凈工作臺 

       目前絕大部分細胞實(shí)驗室使用超凈工作臺實(shí)現無(wú)菌操作,具有操作簡(jiǎn)單、安裝方便、占用空間小且凈化效果很好。小代君為您介紹兩種主要超凈工作臺-側流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區,從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。 

       (1) 側流式工作臺:空氣凈化后的氣流由左或右側通過(guò)工作臺面流向對側,也有從上向下或從下向上流向對側,形成氣流屏障保持工作區無(wú)菌,工作臺結構為封閉式; 

       (2) 外流式工作臺:凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作,工作臺結構為開(kāi)放式,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗操作對操作者不利。超凈工作臺應需要定期請有關(guān)部門(mén)檢查潔凈度,符合要求的超凈工作臺其潔凈度應達到100級,用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過(guò)3.5個(gè)/L;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個(gè),根據無(wú)菌狀況必要時(shí)需要置換過(guò)濾器。 

 ★ 2. 顯微鏡 

       倒置式顯微鏡是細胞培養實(shí)驗室日常工作常規必備設備,主要用于日常了解細胞的生長(cháng)情況并觀(guān)察有無(wú)污染發(fā)生。如資金允許,建議選用配置有照相系統的高品質(zhì)相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時(shí)電影拍攝裝置等,可隨時(shí)拍攝并記錄細胞生長(cháng)情況。 

★ 3. 培養箱 

       體外培養的細胞和體內細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,一般最適生長(cháng)溫度為37℃,溫差變化不應超過(guò)±0.5℃。溫度升高2℃時(shí),變不利于細胞生存,溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此,可精確控溫的恒溫培養箱、CO2培養箱是最佳選擇。 

       (1) 恒溫培養箱:應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱,此類(lèi)培養箱靈敏度高,溫度控制較穩定。一般的恒溫培養箱價(jià)格較便宜,其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養。 

       (2) CO2培養箱:目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細胞培養時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于穩定培養液pH,適用于開(kāi)放或半開(kāi)放培養。使用培養瓶時(shí),為使培養瓶?jì)扰c外界保持通氣狀態(tài),可將瓶蓋略微旋松,為避免細胞被污染,使用這種培養方式時(shí),培養箱內空氣必須保持清潔,需定期用紫外線(xiàn)照射或酒精消毒,同時(shí)培養箱內應放置盛有無(wú)菌蒸餾水的水槽,防止培養液蒸發(fā),保持箱內相對濕度在100%。 

       (3) 細胞培養耗材:培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶。

★ 4. 烘箱(干燥箱) 

       用于細胞培養的一些器械、器皿必須烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí),烘箱內溫度一般要達到160℃以上,通常使用鼓風(fēng)式烘箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好,缺點(diǎn)是升溫過(guò)程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開(kāi)始,至100℃時(shí),停止鼓風(fēng)。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細胞的生長(cháng)。消毒后不能立即打開(kāi)箱門(mén),以免驟冷導致玻璃器皿破裂,應等溫度自然下降至100℃以下后可開(kāi)門(mén)。 

★ 5. 水純化裝置 

       細胞培養對水的質(zhì)量要求較高,細胞培養、細胞培養相關(guān)液體的配制用水以及清洗細胞培養器皿用水都必須事先經(jīng)過(guò)嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結合,可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便,可掛壁式、臺式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據各類(lèi)實(shí)驗用水要求選擇配置殺菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉熱源、內毒素的超濾型純水裝置。

★ 6. 冰箱 

       細胞培養實(shí)驗室必備設備,應專(zhuān)用,不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細胞有害的物質(zhì),且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。 

       普通冰箱:儲存培養液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養用的物品,可短期保存組織樣本。

       -20℃低溫冰箱、超低溫冰箱:用于儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長(cháng)時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。 

★ 7. 細胞冷凍儲存器 

       儲存器常用的液氮容器,根據使用需要分為不同類(lèi)型和規格。選擇液氮容器時(shí)需要考慮三個(gè)因素:容積大小、取放使用方便、液氮揮發(fā)量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以?xún)Υ?ml的凍存管250-15000個(gè)左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃,使用時(shí)應注意避免凍傷。由于液氮易揮發(fā),需注意觀(guān)察剩余液氮量,及時(shí)補充,避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇,可配置有電子控制器的液氮儲存器,實(shí)現凍存自動(dòng)化;并可監測液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處于設定溫度點(diǎn);可配置報警系統,設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警;同時(shí)具備熱氣體旁路系統,防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐,從而更有效地保護樣品,防止容器內升溫。另外,可選擇液氮供應罐通過(guò)連接管給儲存罐補充液氮,保證樣品安全。 

★ 8. 離心機 

       細胞培養時(shí),通常使用離心機制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規配置4000rpm臺式離心機;若要做細胞沉降,需要使用80-100G離心力,因為離心力過(guò)大會(huì )損傷細胞。根據不同要求,有大容量、可調溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。

★ 9. 天平 

       常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據取樣量量和精度要求選擇合適的天平:取樣量大于100mg宜選用精確度0.1mg的天平;取樣量100-10mg,選用精確度0.01mg的天平;取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準,可選擇有自動(dòng)校準功能的天平,方便維護。天平使用需要注意清潔,避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱(chēng)量臺。



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